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人胸腺表達(dá)趨化因子ELISA檢測(cè)試劑盒分析方法

發(fā)布時(shí)間:2021-09-29   點(diǎn)擊次數(shù):1428次

人胸腺表達(dá)趨化因子ELISA檢測(cè)試劑盒分析方法

ELISA試劑盒

標(biāo)本:血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

種屬:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚(yú)等。

用途:科研實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷.

特點(diǎn):靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好.

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試劑盒組成及試劑配制 

1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):6瓶。

3. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

4. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

5. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

6. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 

7. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 

8. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)


實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗C3抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

標(biāo)本的采集及保存

1. 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4. 樣本處理:血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。

人胸腺表達(dá)趨化因子ELISA檢測(cè)試劑盒分析方法


ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng):

1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。

5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8)加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

9)按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作







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